? ?EZ Trans是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機(jī)大分子，每相隔二個(gè)碳個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子，使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”體。其轉(zhuǎn)染性能好于樹枝狀聚合物，而且它的細(xì)胞毒性低。

PEI 細(xì)胞轉(zhuǎn)染液使用方法：

瞬時(shí)轉(zhuǎn)染方法

1.?接種細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天，用膠原酶消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細(xì)胞濃度，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿，每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到 70~80%。

2.?準(zhǔn)備 DNA-PEI 復(fù)合物： DNA、EZ Trans 試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)下表所示，用 Opti-MEM ITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量 DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋EZ Trans 試劑。每 1 μg DNA 需用2-5 μL EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有 DNA 溶液的試管，一邊將稀釋的EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置 10~25 min 以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí)，請用圓底聚丙烯管，例如 Falcon 5 mL /14 mL 離心管。

3.?轉(zhuǎn)染細(xì)胞：直接向每個(gè)孔中加入 DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí)，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染 3 h 后，添加1/2體積的包含 30%血清的生長培養(yǎng)基。

4.?孵育細(xì)胞和分析結(jié)果：在 CO2培養(yǎng)箱中 37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染后最快 7h 即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。請自行確定最適合檢測時(shí)間。

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