1.?反應

（1）取三個反應管，分別標記為陽性對照管（Positive）、測試管（Test）和陰性對照管（Negative），各加入25 μL的水化溶液（-20℃保存的水化液可以放37℃水浴融化），吹吸數次直到所有凍干粉劑徹底溶解（凍干品較難溶解，需要緩慢吹吸約20-50下。此過程，如有大氣泡產生或者小氣泡過多，必須去除，否則嚴重影響反應結果！氣泡可以用套管離心的方法去除）。盡量在沒有操作過支原體的房間進行上述步驟。將所有反應管蓋子蓋上，在另外一個房間內進行下一步的操作。

（2）往陽性對照管中加入1 μL陽性支原體DNA，測試管中加入1 μL待測細胞培養液，陰性對照管不加。

（3）水浴內反應：往每個反應管內加入25?μL礦物油，以防止水份揮發，蓋上蓋子，將反應管插入帶孔的漂板內，放入已經升溫到61℃的水浴內，準確反應60分鐘。

注：a 試劑盒所用的酶對溫度敏感，器顯示溫度與實際溫度的溫差盡量不超過0.5℃。如果溫差超過2℃，將導致酶活性降低，擴增速度也降低，在規定的反應時內，陽性 ? ? ? ? ? ? 對照可能無法呈現典型的藍綠色。此時需用水銀溫度計校準水浴的溫度。

? ?b 如方便使用PCR儀，強烈建議在PCR儀上進行反應，這樣可以準確控制反應的時間和溫度。PCR儀參數如下：61℃，60 min；20℃, ∞；熱蓋溫度，100 ℃。

? ?c?在帶熱蓋的PCR儀上進行反應，無需在反應管內加入礦物油。

http://www.chem17.com/st325538/product_24803069.html?
http://www.life-ilab.com.cn/ParentList-1375919.html