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微孔板包被了與生物素具有高親和性的親和素(Avidin),分 別向微孔中加入一定量的標準品或樣本、酶標記物(酶標記 的生物素)。樣本或標準品中的生物素與酶標的生物素競爭結 合微孔板上包被的親和素。未能與親和素結合的生物素在洗 滌步驟中被除去。將底物加入到孔中孵育,成功與微孔板上 包被的生物素結合的酶標記物催化微孔溶液產生顏色反應。最后加入終止液終止反應,并在 405nm 處測量各微孔吸光度值,吸光度比值與生物素濃度成比例。
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