微生物檢測凍干質控菌種使用說明書

1 復蘇菌種前應準備適于該菌種生長的固體、液體培養基和培養設備，所有操作均應在符合生物安全保護及無菌條件下進行。

2 啟開菌種前，用75%酒精棉消毒西林瓶表面。在無菌條件下，按鋁蓋上的箭頭方向打開塑蓋，撕開鋁蓋，打開西林瓶膠塞，加入0.3mL左右的配套液體培養基，用無菌滴管反復吹吸，將凍干菌種溶解成為懸液，然后用無菌滴管或接種環移至斜面、平板或液體培養基，并連同剩余菌懸液的西林瓶一起放置于36℃培養箱中進行培養。（菌種與培養和保存方法對應表見附表1，培養基、培養方法和傳代保存方法見附表2）。

3 次日觀察菌種的生長情況，如未生長，應繼續培養24h，或吸取培養之后的菌懸液中再次接種培養基，培養24h觀察。

4 菌株為一次性使用品，開啟之后不能反復使用或保存，暫不開啟的菌種應在4℃保藏。

5 復蘇后的菌種在傳1-2代后使用，建議菌種使用5代后棄用。

注）：購買后請盡量及時使用凍干菌種，如發現菌種不活或污染等情況，請在購買之日起1個月內與我們聯系。

附表2 培養基、培養條件和保存方法

方法1：

無菌條件下，用無菌吸管往西林瓶凍干菌粉中加入腦心浸液培養基，充分懸浮后取適量的菌懸液于營養瓊脂（022020）斜面上35－37℃劃線培養24－48h。斜面（第一代）放于4℃冰箱保存，每個月轉接一次，代數以此類推，建議使用菌種代數不超過5代，5代后菌種應銷毀。

方法2：

無菌條件下，用無菌吸管往西林瓶凍干菌粉中加入腦心浸液培養基，充分懸浮后取適量的菌懸液于營養瓊脂（022020）斜面上劃線35－37℃培養24－48h。斜面（第一代）放于25℃下保存，每個月轉接一次，代數以此類推，建議使用菌種代數不超過5代，5代后菌種應銷毀。

方法3：

無菌條件下，用無菌吸管往西林瓶凍干菌粉中加入腦心浸液培養基，充分懸浮后取適量的菌懸液于血平板（024070）后涂布，35－37℃培養24－48h。平板（第一代）放于4℃冰箱保存，并用封口膜或其它封條密封平板，每半個月轉接一次，代數以此類推，建議使用菌種代數不超過5代，5代后菌種應銷毀。

方法4：

無菌條件下，用無菌吸管往西林瓶凍干菌粉中加入腦心浸液培養基，充分懸浮后取適量的菌懸液于胰蛋白胨大豆酵母浸膏瓊脂（TSA－YE）（026020）斜面上 35－37℃培養24－48h。斜面（第一代）放于4℃冰箱保存，每個月轉接一次，代數以此類推，建議使用菌種代數不超過5代，5代后菌種應銷毀。

方法5：

無菌條件下，用無菌吸管往西林瓶凍干菌粉中加入腦心浸液培養基，充分懸浮后取適量的菌懸液于皰肉牛肉粒肉湯（027140）加液體石蠟1cm,35－37℃培養48－72h。肉湯（第一代）放于4℃冰箱環境下保存，每半個月轉接一次，代數以此類推，建議使用菌種代數不超過5代，5代后菌種應銷毀。

方法6：

無菌條件下，用無菌吸管往西林瓶凍干菌粉中加入堿性蛋白胨水，充分懸浮后取適量的菌懸液于堿性瓊脂（025040）斜面上35－37℃培養24－48h。斜面（第一代）放于25℃下保存，每個月轉接一次，代數以此類推，建議使用菌種代數不超過5代，5代后菌種應銷毀。

方法7：

無菌條件下，用無菌吸管往西林瓶凍干菌粉中加入3％NaCl堿性蛋白胨水，充分懸浮后放置于36℃下復蘇8-12小時。取適量的菌懸液于3％NaCl營養瓊脂（營養瓊脂（022020）加入2.5gNaCl/100mL）斜面上35－37℃培養24－48h。斜面（第一代）放于25℃下保存，每個月轉接一次，代數以此類推，建議使用菌種代數不超過5代，5代后菌種應銷毀。

方法8：

無菌條件下，用無菌吸管往西林瓶凍干菌粉中加入沙氏液體培養基，充分懸浮后取適量的菌懸液于馬鈴薯葡萄糖瓊脂 （PDA）（021050）斜面25－28℃培養2－5天。斜面（第一代）放于4℃冰箱保存，每兩個月轉接一次，代數以此類推，建議使用菌種代數不超過5代，5代后菌種應銷毀。

方法9：

無菌條件下，用無菌吸管往西林瓶凍干菌粉中加入布氏肉湯，充分懸浮后取適量的菌懸液于血平板（024070）42±1℃微需氧條件下培養48－72h。平板（第一代）放于4℃冰箱微需氧環境下保存，并用封口膜或其它封條密封平板，每個星期轉接一次，代數以此類推，建議使用菌種代數不超過5代，5代后菌種應銷毀。

方法10：

無菌條件下，用無菌吸管往西林瓶凍干菌粉中加入TPY肉湯，充分懸浮后取適量的菌懸液于BBL瓊脂（027330）斜面厭氧環境下35－37℃培養48h－72h。斜面（第一代）放于4℃冰箱厭氧環境下保存，每個星期轉接一次，代數以此類推，建議使用菌種代數不超過5代，5代后菌種應銷毀。

方法11：

無菌條件下，用無菌吸管往西林瓶凍干粉中加入脫脂奶粉溶液，充分懸浮后取適量的菌懸液于脫脂奶粉溶液（10%）35－37℃培養48h-72h。 菌種（第一代）放于4℃冰箱保存，每兩個星期轉接一次，代數以此類推，建議使用菌種代數不超過5代，5代后菌種應消毀。